常見問題

PCR實驗室設計及建設要求


PCR實驗指的是基因擴增實驗,其特點是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學研究和實驗的常規方法,PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領域,例如:艾滋病檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫物證等等。博泰小編帶大家了解PCR實驗室設計及建設的相關信息:

  

一、PCR實驗室布局

  

PCR實驗室原則上為試劑準備區,樣品制備區,擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域,并設有專用走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區,后兩區為擴增后區,即從:試劑準備區——樣品制備區——PCR擴增室——產物分析室,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動。各工作區頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長為254mm,每20㎡一支40W的紫外燈。

  

二、實驗室各區功能及主要設備

  

1、試劑準備區:主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平,冰箱,離心機,加樣器,振蕩器等。對于氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求,一般為+10Pa。

  

2、樣品制備區:主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱,生物安全柜,離心機,加樣器,振蕩器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染,一般為+10Pa。

  

3、擴增區:主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板(來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有:擴增儀,冰箱,離心機,加樣器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶從本區漏出一般為-25Pa。

  

4. 擴增產物分析區:擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀,洗板機.加樣器和水浴箱等。本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,一般為-25Pa,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域

  

三、PCR實驗室通風系統及壓力控制

  

各區域之間應具備單間的實驗工藝流,物流,人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗室之間的相互干擾,防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。

  

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴格控制送,排風的比例以保證個實驗區的壓力要求。

  

四、PCR實驗室裝飾

  

實驗室圍護結構應牢固,氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過度;墻體內壁光潔,不積塵,耐腐蝕,易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環氧樹脂自流坪,材料應滿足無縫隙,無滲漏,光潔,耐腐蝕的要求。

  

五、PCR實驗室注意事項

  

1、幾個區域的大小設置情況,試劑準備區,擴增區,擴增產物分析區,空間可以相對小一些,樣品制備區要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應大一些。

  

2、試劑準備區,樣品制備區設緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。


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